Metodi moderni per la determinazione delle proteine ​​nelle urine. Determinazione qualitativa delle proteine ​​nelle urine

Tutti i metodi per determinare le proteine ​​nelle urine si basano sulla coagulazione delle proteine ​​sotto l'influenza di agenti chimici o termici. Se sono presenti proteine ​​​​nelle urine, appare torbidità, il cui grado dipende dalla quantità di proteine.

UN) campioni di qualità la determinazione delle proteine ​​nelle urine è obbligatoria.

1. Test con acido nitrico– in una provetta con 1-2 ml di soluzione al 50%. acido nitrico Stratificare con cura una uguale quantità di urina, facendo attenzione a non agitare il liquido. Se nelle urine sono presenti proteine, al confine dei due liquidi appare un anello bianco, meglio visibile su sfondo nero.

2. Test con acido solfasalicilico– Si versano 4-5 ml di urina in una provetta e si aggiungono 8-10 gocce del reagente. Se sono presenti proteine ​​nelle urine, a seconda della loro quantità, possono verificarsi torbidità o flocculazione.

3. Test rapido (campione diagnostico secco)– una striscia di cartina indicatrice Albufan viene immersa nell'urina da analizzare in modo da bagnare contemporaneamente entrambe le zone indicatrici (la zona superiore serve per la determinazione del pH, la zona inferiore per la determinazione delle proteine). Dopo 2-3 secondi, la striscia viene posizionata su una lastra di vetro bianco. La valutazione viene effettuata 60 secondi dopo aver bagnato la striscia con l'urina, utilizzando la scala di colori stampata sull'astuccio con strisce indicatrici.

B) campioni quantitativi– effettuato in quelle porzioni di urina in cui è stata rilevata la proteina durante la sua determinazione qualitativa; la determinazione viene effettuata nello strato surnatante dopo la centrifugazione

Metodo Brandberg-Roberts-Stolnikov– Si versano 1-3 ml di soluzione di acido nitrico al 50% in una provetta e si stratifica accuratamente la stessa quantità di urina lungo la parete. Il tempo viene registrato su un cronometro. Se si forma un anello al confine dei liquidi immediatamente o prima di 2 minuti dopo la stratificazione, l'urina deve essere diluita con acqua. Successivamente, le proteine ​​vengono nuovamente determinate nell'urina diluita. La diluizione viene effettuata fino alla comparsa di un anello bianco tra il 2° e il 3° minuto quando l'urina diluita viene applicata all'acido nitrico. La quantità di proteine ​​viene determinata moltiplicando 0,033 ppm per il tasso di diluizione.

18. Tecnica per prelevare strisci per flora, gonococchi, trichomonas, esame citologico, KPI.

Tecnica per prendere strisci per la flora: il materiale viene prelevato dal canale cervicale e dall'uretra con apposito spazzolino sotto controllo visivo. Il campione risultante viene immediatamente posto su un vetrino e macinato.

Tecnica per prelevare strisci per Trichomonas: in primo luogo, il materiale viene prelevato raschiando dalla mucosa dell'uretra (dopo un massaggio preliminare per 1 minuto sulla sinfisi pubica) e dal fornice posteriore della vagina, quindi la parte vaginale della cervice viene pulita con un tampone sterile tampone inumidito con soluzione salina, il tappo mucoso viene rimosso e canale cervicale inserire con attenzione una sonda a una profondità non superiore a 1,0-1,5 cm e raschiare la mucosa della cervice.

Tecnica per prelevare strisci per gonococchi: il materiale viene prelevato dall'uretra, dalle ghiandole di Bartolini e dai dotti parauretrali dopo averli puliti con un batuffolo di cotone imbevuto di soluzione salina, una pinzetta vaginale o un'apposita sonda. Il materiale viene prelevato dal retto con un cucchiaio smussato. In caso di gonorrea cronica e torpida, prima dello studio viene effettuata una provocazione per aumentare la probabilità di identificare l'agente patogeno.

Non puoi prendere il materiale con un batuffolo di cotone durante le mestruazioni.

Tecnica per il prelievo di strisci per l'esame citologico: si preleva uno striscio dalla superficie dell'esocervice, della vagina e della vulva con una spatola, dall'endocervice con un endo-spazzolino. Il materiale viene applicato in uno strato sottile su vetro sgrassato appositamente trattato e lavorato composizione speciale per evitare che le cellule si secchino. I preparati vengono colorati con il metodo Papanicolaou (il cosiddetto PAP test) ed esaminati al microscopio.

Indice cariopicnotico– percentuale di cellule superficiali con nuclei picnotici rispetto a cellule con nuclei vescicolari (non picnotici). CPI all'inizio della fase follicolare ciclo mestruale 25-30%, al momento dell'ovulazione 60-70%, nella fase luteale diminuisce al 25%.

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L'urina di un bambino sano contiene proteine una piccola quantità e non viene rilevato dai normali campioni qualitativi. La quantità di proteine ​​nelle urine (proteinuria) aumenta in caso di malattie renali, tossicosi, leucemia, anemia perniciosa, congestione renale, dopo la palpazione dei reni (albuminuria palpabile) e stanchezza fisica, con sovraccarico emotivo, febbre, ipotermia e altre condizioni.
Determinazione qualitativa delle proteine ​​nelle urine. Per la determinazione qualitativa delle proteine ​​nelle urine, il test più utilizzato è l'acido solfosalicilico, il test di Heller con acido nitrico, il test di ebollizione, ecc. Quando si utilizzano test basati sulla precipitazione delle proteine, per evitare errori, è importante osservare alcune regole generali.

1. L'urina dovrebbe essere acida. Se la reazione dell'urina da analizzare è alcalina, viene leggermente acidificata aggiungendo acido acetico. Tuttavia, la quantità di acido non deve essere elevata per non provocare la dissoluzione dell'albumina.
2. L'urina dovrebbe essere limpida. Se è presente torbidità, questa deve essere rimossa senza provocare la precipitazione delle proteine.
3. Il campione deve essere realizzato in due provette: una sperimentale e una di controllo. In assenza di controllo, è possibile che non si noti una leggera torbidità delle urine nella provetta.

Il test con acido solfosalicilico è uno dei più sensibili alla presenza di proteine ​​nelle urine. 3-5 ml di urina vengono versati in una provetta e viene aggiunta una soluzione al 20% di acido solfosalicilico in ragione di 2 gocce per 1 ml di urina.
In un'altra modifica, per prelevare un campione, 1 ml di urina viene versato in una provetta e ad essa vengono aggiunti 3 ml di una soluzione all'1% di acido solfosalicilico.

Nel primo e nel secondo caso, se sono presenti proteine ​​​​nelle urine dopo l'aggiunta di acido solfosalicilico, appare torbidità. Il risultato viene preso in considerazione in base all'intensità della torbidità: una reazione debolmente positiva (opalescenza) viene designata (sl. +), positiva (+), fortemente positiva.
Viene eseguito il test di Heller nel seguente modo: su 1-2 ml di una soluzione di acido nitrico al 30% con densità relativa di 1,20, stratificare accuratamente (senza mescolare) alcuni ml di urina. Se nelle urine sono presenti 0,033 g/l o più di proteine, sul bordo di entrambi i liquidi si forma un anello bianco, che viene valutato come test positivo. Se l'urina contiene una grande quantità di urati, si può formare anche un anello bianco, ma si trova appena sopra il confine tra i liquidi. Quando leggermente riscaldato, l'anello dell'urato scompare.
Il test di ebollizione fornisce risultati affidabili, ma solo se l'urina ha un pH pari a 5,6. Questo test viene eseguito al meglio nella modifica di Ruppert con tampone acetato di Bange, che contiene 56,5 ml di acido acetico glaciale, 118 g di acetato di sodio cristallino, sciolti in 1 litro di acqua. Aggiungere 5 ml di urina a 1-2 ml di tampone Bange e far bollire per 1/2 min. Se ci sono proteine ​​nelle urine, si formerà una torbidità.
Determinazione quantitativa delle proteine ​​nelle urine. Per la determinazione quantitativa delle proteine ​​nelle urine, vengono spesso utilizzati il ​​metodo Esbach, il metodo Brandberg-Roberts-Stolnikov, il metodo Sauls biuret, ecc.
Il metodo Brandberg-Roberts-Stolnikov si basa su un test qualitativo di Heller e consente di determinare la presenza di proteine ​​nelle urine a partire da 0,033 g/l. Sono in preparazione alcune provette. L'urina contenente proteine ​​viene diluita con soluzione salina o acqua finché non cessa di formarsi un anello bianco sull'interfaccia dei liquidi (reagente di Roberts-Stolnikov e urina). Tra il secondo e il terzo minuto appare un anello all'interfaccia di due liquidi con un contenuto proteico di 0,033 g/l. Se l'anello appare prima o dopo pochi minuti, l'urina viene diluita con acqua. La più alta diluizione di urina in cui si forma un anello contiene 0,033 g/l di proteine. Il grado di diluizione dell'urina nell'ultima provetta viene moltiplicato per 0,033 g/l per ottenere la concentrazione proteica nell'urina intera.

Proteinuria. Nelle malattie renali, è causata da un aumento della permeabilità filtro renale. Le proteine ​​possono anche entrare nelle urine in un altro modo (dalle mucose delle vie urinarie, della vagina, della prostata, ecc.) - proteinuria extrarenale. La proteinuria renale si divide in organica e funzionale. La proteinuria organica è associata a danno del parenchima renale, mentre la proteinuria funzionale è associata a disturbi vasomotori. Un tipo di proteinuria funzionale è l'albuminuria ortostatica (lordotica, intermittente, posturale, ciclica). Si ritiene che con una lordosi pronunciata si crei una posizione in cui la vena cava inferiore viene premuta contro la colonna vertebrale dal fegato, e questo porta al ristagno nelle vene renali e all'albuminuria congestizia. Studi al microscopio elettronico hanno stabilito che con l'albuminuria ortostatica vi sono segni morfologici di un processo infiammatorio nei glomeruli renali.

Dalle nostre osservazioni a lungo termine emerge che l’albuminuria ortostatica è spesso causata da anomalie renali o dalla loro localizzazione anomala, a questo proposito consigliamo di utilizzare rottura ortostatica come test di screening. Dopo aver identificato l'albuminuria ortostatica mediante questo test, di solito eseguiamo un'urografia escretoria per escludere anomalie nello sviluppo del sistema urinario.
Prova ortostatica. Alla vigilia del test, la sera, circa un'ora prima di andare a dormire, il bambino dovrebbe svuotarsi vescia. Al mattino, alzandosi dal letto, urina immediatamente e questa urina viene raccolta in un contenitore separato, contrassegnato come porzione prima dell'esercizio. Quindi viene chiesto al bambino di inginocchiarsi su una sedia semimorbida con un bastone dietro la schiena, afferrandolo con i gomiti. Il bambino dovrebbe rimanere in questa posizione per 15-20 minuti, dopodiché svuota la vescica e annota l'urina raccolta come porzione dopo l'esercizio. Le proteine ​​vengono esaminate nei campioni di urina ottenuti prima e dopo l'esercizio. Il rilevamento o l'aumento di 2-3 o più volte del contenuto proteico nella seconda porzione (ottenuta dopo l'esercizio) rispetto alla prima viene valutato come test ortostatico positivo.
Determinazione delle frazioni proteiche nelle urine. Vengono eseguiti gli elementi inferiori. Con glomerulonefrite, tubercolosi, malattia renale policistica, tumori renali, vasculite emorragica, collagenosi, infiammazione della vescica e altre malattie, può esserci una quantità significativa di globuli rossi nelle urine. Esistono macro e microematuria. Nell'ematuria macroscopica si può già notare macroscopicamente che il colore dell'urina cambia. A causa della presenza di un gran numero di globuli rossi nelle urine, queste diventano rosse o “il colore della polpa di carne”. Nella microematuria, i globuli rossi vengono rilevati solo mediante microscopia del sedimento.
La penetrazione degli eritrociti nelle urine durante la glomerulonefrite e l'intossicazione è dovuta all'aumentata permeabilità dei capillari glomerulari e alle loro rotture. Nelle malattie infiammatorie delle vie urinarie, dei calcoli del bacino, degli ureteri e della vescica, i globuli rossi entrano nelle urine dalle mucose danneggiate. È possibile raccogliere l'urina in porzioni (campioni di due e tre bicchieri) durante una minzione alta probabilità scoprire da quale segmento del sistema urinario proviene l'ematuria. Quindi, con l'ematuria dell'uretra, potrebbero esserci coaguli di sangue nella prima porzione di urina. Se l'ematuria è causata da un'infiammazione acuta della mucosa, da un calcolo o da altre malattie della vescica, con l'ultima porzione di urina verrà rilasciato più sangue. Con l'ematuria associata al danno dell'uretere, talvolta si trovano cilindri di fibrina, la cui forma corrisponde al lume dell'uretere. Nelle malattie renali diffuse, l'ematuria colora uniformemente l'urina escreta.
Leucociti. Nelle urine di un bambino sano possono essere singoli nel campo visivo. Il rilevamento di 5-7 leucociti in ciascun campo visivo indica un processo infiammatorio nelle vie urinarie. Va però sempre escluso che i leucociti entrino nelle urine dai genitali esterni, cosa che avviene con fimosi, balanite e balanopostite nei ragazzi e con vulvovaginiti nelle ragazze. I test a due e tre vetri sono ampiamente utilizzati per la leucocituria.
Cilindri. Nelle urine possono presentarsi sotto forma di calchi ialini, granulari, epiteliali e cerosi. Tutti possono formarsi quando condizioni patologiche nei reni. Getti nelle urine bambini sani sono rari. Vengono spesso rilevati utilizzando metodi di ricerca quantitativa sedimento urinario. Di norma, si tratta di cilindri ialini, che sono proteine ​​coagulate nel lume dei tubuli. I cilindri epiteliali indicano un danno al parenchima renale e sono costituiti da cellule epiteliali aderenti ai tubuli renali. Con un processo degenerativo più pronunciato, nei reni compaiono calchi granulari e cerosi. Si tratta di calchi di cellule epiteliali tubulari rigettate che hanno subito una degenerazione grassa. Inoltre, nel sedimento urinario si possono trovare cilindri formati da elementi formati, emoglobina e metaemoglobina nel sangue. La base di tali cilindri è solitamente una proteina, su cui sono stratificati altri elementi.
I cilindri sono formazioni simili ai cilindri ialini, costituiti da cristalli di sali di urato di ammonio, muco, leucociti e batteri. I cilindroidi vengono rilevati nella fase di recupero della glomerulonefrite acuta. Differiscono dai cilindri ialini per l'eterogeneità della loro struttura.
Sedimento inorganico. Nei sedimenti inorganici dei bambini si trovano più spesso urati, ossalati, fosfati e cristalli acido urico. Una loro eccessiva escrezione nelle urine può portare alla formazione di calcoli nel tratto urinario.
L'uraturia è un'aumentata escrezione di sali di acido urico nelle urine. Si osserva nei primi giorni di vita dei neonati. A causa della quantità significativa di urato, l'urina dei neonati può avere un colore rosso mattone. Una grande disgregazione degli elementi cellulari nei neonati porta spesso alla formazione di infarto da acido urico, che si risolve entro la fine della prima settimana di vita, poiché i sali di urato vengono rimossi con l'aumento della diuresi. L'uraturia nei bambini più grandi può essere associata al consumo di grandi quantità di carne, all'affaticamento muscolare e a condizioni febbrili. L'iperuraturia può essere causata dall'iperuricemia ereditaria, che è particolarmente pronunciata nella sindrome di Lesch-Nyhan.
L'ossalaturia è un'aumentata escrezione di ossalato di calcio nelle urine, che può essere associata al consumo di alimenti ricchi di acido ossalico. Prodotti di questo tipo includono acetosa, spinaci, pomodori, piselli, fagioli, ravanelli, tè, caffè, ecc. L'ossalaturia può anche essere causata da processo patologico nel corpo del bambino, accompagnato da disgregazione dei tessuti (distrofia, tubercolosi, diabete, bronchiectasie, leucemia, ecc.). L'ossalaturia è anche conosciuta come malattia ereditaria, spesso complicato da calcoli renali e pielonefrite cronica. Con grave ossalaturia, il contenuto di ossalato nelle urine giornaliere è 3-4 volte o più superiore al valore consentito (la norma è 8-10 mg%).
La fosfaturia è un'aumentata escrezione nelle urine di sali di fosfato che precipitano nelle urine alcaline. Osservato quando si mangiano cibi origine vegetale(verdura, frutta, ecc.), così come durante il processo infiammatorio nella mucosa delle vie urinarie, quando si verifica la fermentazione batterica e l'alcalinizzazione delle urine. La fosfaturia può causare la formazione di calcoli alla vescica.

Istruzioni

Metodi qualitativi per la determinazione delle proteine urina: Metodo Geller, test con una soluzione al 20% di acido solfosalicilico, test di ebollizione, ecc. Metodi semiquantitativi: utilizzo di strisce reattive diagnostiche per determinare le proteine ​​in urina, Metodo Brandberg-Roberts-Stolnikov. Metodi quantitativi: turbidimetrico e colorimetrico.

Determinazione delle proteine ​​nell'indennità giornaliera urina in una concentrazione di 0,033 g/litro o più è una patologia. Di norma, nella porzione mattutina delle urine la concentrazione proteica non supera 0,002 g/l, mentre nella dose giornaliera urina la concentrazione proteica non è superiore a 50-150 mg di proteine.

Fonti:

• determinazione delle proteine ​​nelle urine

L'urina è un prodotto del metabolismo umano. Si forma durante la filtrazione del sangue nei reni, motivo per cui la composizione dell'urina fornisce una chiara descrizione dello stato del corpo umano.

L'urina è una soluzione complessa composta da più di 150 composti. Alcune sostanze specifiche, ad esempio acetone, acidi biliari, proteine, glucosio, possono essere presenti solo in alcune malattie.

Per controllare la salute umana, prima di tutto, è necessario determinare la quantità di urina. La norma è la produzione di 1-1,8 litri di urina al giorno. Quando vengono prodotti più di 2 litri di urina, questo è un segno possibile violazione nella funzionalità renale, diabete mellito e una serie di altre malattie. Se vengono prodotti meno di 0,5 litri di urina al giorno, c'è un blocco dell'uretere o della vescica.

Colore dell'urina

Dopo l'assunzione di farmaci, l'urina può colorarsi e assumere una tinta rossastra. Se una persona si muove attivamente e produce una grande quantità di sudore, l’urina sarà intensa. giallo, come quando si assumono farmaci come Nitroxolina o Biomicina.

Se una persona non ne ha preso nessuno prodotti coloranti alimentazione e farmaci, ma il colore delle sue urine è diverso dal solito, si può sospettare la presenza di qualche malattia nel corpo. Ad esempio, in caso di malattia del fegato, l'urina avrà un colore giallo scuro o verdastro.

La presenza di sangue nelle urine escrete indica chiaramente la presenza di calcoli o sanguinamento renale, se si osserva anche dolore.

Se la minzione è difficile, ciò potrebbe indicare un processo infiammatorio causato da qualche tipo di infezione nella vescica. Ma è sporco e urina torbida indica malattie gravi rene

Proteine ​​nelle urine

È impossibile al 100% determinare visivamente se le proteine ​​sono presenti o meno nelle urine. Si può solo immaginare quando c'è una grande quantità di scaglie biancastre nelle urine.

Se la proteina viene rilevata ripetutamente nelle urine, ciò indica la presenza di qualche tipo di malattia renale. I processi infiammatori che si verificano in essi provocano un leggero aumento della quantità di proteine. Se più di 2 grammi vengono escreti nelle urine, questo è segnale di allarme.

La pielonefrite è una malattia infiammatoria che colpisce la pelvi renale, i calici e il parenchima. Nella maggior parte dei casi, la causa dell’infiammazione è un’infezione batterica. Il recupero completo è possibile solo con una diagnosi tempestiva, pertanto, quando compaiono i sintomi, è necessario un esame approfondito.

Test qualitativi per la determinazione delle proteine ​​nelle urine
Sono state proposte più di 100 reazioni per la determinazione qualitativa delle proteine ​​nelle urine. La maggior parte di essi si basa sulla precipitazione proteica mediante fisica (riscaldamento) o sostanze chimiche. La presenza di proteine ​​è confermata dalla comparsa di torbidità.

Sono interessanti anche i campioni colorimetrici secchi.

Di seguito verranno descritte solo le prove più importanti per la pratica.

Prova con acido solfosalicilico. A diversi millilitri di urina aggiungere 2-4 gocce di una soluzione al 20% di acido solfosalicilico. A reazione positiva appare torbidità. Il risultato è designato dai termini: opalescenza, reazione debolmente positiva, positiva o fortemente positiva. Il test dell'acido solfosalicilico è uno dei test più sensibili per rilevare le proteine ​​nelle urine. Rileva anche gli aumenti patologici più lievi delle proteine ​​nelle urine. Grazie alla sua tecnica semplice, questo test ha trovato ampia applicazione.

Prova con aseptolo. Aseptol è un sostituto dell'acido solfosalicilico. Può essere preparato da materiali disponibili in qualsiasi laboratorio (fenolo e acido solforico). Come reagente viene utilizzata una soluzione di Aseptol al 20%. Il test si effettua nel seguente modo: in una provetta contenente 2-3 ml di urina aggiungere sul fondo 0,5-1 ml di soluzione di aseptolo. Se all'interfaccia tra i due liquidi appare un anello bianco di proteina coagulata, il campione è positivo.

La prova di Heller. A pochi millilitri di urina aggiungere 1-2 ml di acido nitrico al 30% (peso specifico 1,20). Se appare un anello bianco sul bordo di entrambi i liquidi, il campione è positivo. La reazione diventa positiva se il contenuto proteico è superiore a 3,3 mg%. A volte, se presente, si ottiene un anello bianco grandi quantità urati. A differenza dell'anello proteico, l'anello dell'urato non appare al confine tra i due liquidi, ma leggermente al di sopra. Larionova suggerisce di utilizzare come reagente una soluzione di acido nitrico all'1% in una soluzione satura invece dell'acido nitrico al 30% sale da tavola; ciò si traduce in un maggiore risparmio di acido nitrico.

Prova con solfuro ferrico potassio e acido acetico . Questa reazione permette di distinguere le proteine ​​sieriche dalle nucleoalbumine.

Versare in due provette quantità uguali urina. Ad uno di essi vengono aggiunte alcune gocce di una soluzione di acido acetico al 30%. Se il risultato è torbido rispetto alla provetta di controllo, l'urina contiene nucleoalbumina. Se non appare torbidità, il contenuto di entrambe le provette viene miscelato e nuovamente diviso in due parti. In una delle due provette vengono aggiunte alcune gocce (l'eccesso può trasformare un test positivo in negativo) di una soluzione al 10% di sale giallo del sangue (solfuro di ferro e potassio). In presenza di proteine ​​del siero di latte si ottiene torbidità.

In caso di urina concentrata contenente grandi quantità di acido urico e urati, è necessario eseguire un test con solfuro ferrico di potassio e acido acetico dopo aver diluito preventivamente (2-3 volte) l'urina con acqua. In caso contrario, potrebbe verificarsi torbidità a causa dell'acido urico depositato.

Ciò è particolarmente importante quando si esamina l'urina neonati, contenente molto acido urico e urati.

Degli altri test qualitativi per le proteine ​​nelle urine, basati sulla precipitazione delle proteine, sono stati utilizzati i seguenti: test di ebollizione, Esbach, Purdy, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jollet, Test Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendahl-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushiya, ecc.

Quando si producono campioni di alta qualità per proteine ​​nelle urine in base alla precipitazione proteica, è necessario osservare le seguenti regole generali, la cui violazione porta a errori significativi nello studio.

1. L'urina da analizzare deve essere acida. Per una reazione alcalina, l'urina viene leggermente acidificata con acido acetico. La produzione di un campione di urina alcalino nei casi in cui viene utilizzato un acido come reagente può provocare la neutralizzazione dell'acido e risultato negativo con una reazione positiva. Ciò è particolarmente vero per il test con acido solfosalicilico, poiché l'acido viene aggiunto in quantità molto piccole e può essere facilmente neutralizzato.

2. L'urina da analizzare deve essere limpida.

3. I campioni per la determinazione delle proteine ​​nelle urine devono essere sempre prelevati in due provette, una delle quali funge da controllo. Senza una provetta di controllo, potresti non notare una leggera torbidità durante le reazioni.

4. La quantità di acido aggiunto durante il test non deve essere eccessiva. Una grande quantità di acido può portare alla formazione di acidoalbumina solubile e trasformare un campione positivo in negativo.

Meritare molta attenzione, grazie alla sua tecnica semplice, campioni secchi colorimetrici. Questi test sfruttano l'effetto che le proteine ​​hanno sul colore dell'indicatore nella soluzione tampone (il cosiddetto errore proteico degli indicatori). Viene immersa una striscia di carta da filtro imbevuta di tampone acido di citrato e blu di bromofenolo come indicatore poco tempo nelle urine. Il test è positivo se il colore è blu-verde. Confrontando l'intensità del colore con gli standard della carta colorata, è possibile trarre conclusioni provvisorie e quantitative. La carta indicatrice è venduta in risme con standard di colore corrispondenti, simili alla carta indicatrice universale.

Metodi per la determinazione quantitativa delle proteine ​​nelle urine
Sono stati proposti molti metodi per la determinazione quantitativa delle proteine ​​nelle urine. Non sono stati trovati metodi quantitativi accurati per la determinazione delle proteine ​​nel materiale biologico ampia applicazione durante la determinazione delle proteine ​​nelle urine, a causa di una tecnologia complessa e dispendiosa in termini di tempo. I metodi volumetrici, in particolare il metodo Esbach, si sono diffusi. Sono molto semplici, ma sfortunatamente non sono molto accurati. I metodi del gruppo Brandberg-Stolnikov sono convenienti anche per la clinica, poiché forniscono risultati più accurati rispetto ai metodi volumetrici con una tecnica relativamente semplice. Se si dispone di un fotometro o di un nefelometro, sono convenienti anche i metodi nefelometrici.

Metodo Esbach. Fu proposto dal medico parigino Esbach nel 1874. L'urina e un reagente vengono versati in una speciale provetta (albuminometro di Esbach). La provetta viene sigillata con un tappo di gomma, mescolata accuratamente (senza agitare!) e lasciata all'interno posizione verticale fino al giorno successivo. Viene contata la divisione alla quale arriva la colonna di sedimento proteico. Il numero trovato mostra il contenuto proteico. Nel metodo Esbach è molto importante che l'urina sia acida. L'urina alcalina può neutralizzare i costituenti acidi del reagente e prevenire la precipitazione delle proteine.

Vantaggi del metodo: è semplice e conveniente nella pratica.

Svantaggi: il metodo è impreciso, il risultato si ottiene in 24 - 48 ore.

Metodo Brandberg-Stolnikov. Si basa sul test qualitativo di Geller. Il test di Heller può essere utilizzato per la determinazione quantitativa perché dà risultato positivo con un contenuto proteico superiore a 3,3 mg%. Questa è la concentrazione proteica massima al di sotto della quale il campione diventa negativo.

Modifica di Ehrlich e Althausen. Gli scienziati sovietici S. L. Erlikh e A. Ya. Althauzen modificarono il metodo Brandberg-Stolnikov, indicando le possibilità di semplificare lo studio e risparmiare tempo nella sua produzione.

La prima semplificazione è relativa al momento della comparsa dell'anello. Viene determinata l'ora esatta della sua apparizione, senza necessariamente rispettare il 2° e il 3° minuto.

La seconda semplificazione permette di determinare quale tipo di diluizione effettuare. Gli autori hanno dimostrato che la diluizione richiesta può essere determinata approssimativamente dall'aspetto dell'anello risultante. Si distinguono filiformi, larghi
e un anello compatto.

Tra i metodi nefelometrici merita di essere segnalato Metodo Kingsberry e Clark. Versare 2,5 ml di urina filtrata in un piccolo cilindro graduato e rabboccare con una soluzione acquosa di acido solfosalicilico al 3% fino a 10 ml. Mescolare accuratamente e dopo 5 minuti fotometrizzare in una cuvetta da 1 cm utilizzando un filtro giallo, utilizzando acqua come liquido di compensazione. Con il fotometro di Pulfrich l'estinzione riscontrata, moltiplicata per 2,5, dà la quantità di proteine ​​in %o. Nel caso in cui l'indice di estinzione sia superiore a 1,0, l'urina viene prima diluita 2 volte, 4 volte o anche di più.

Per avere un'idea chiara della quantità di proteine ​​escrete nelle urine, è necessario determinare non solo la loro concentrazione in una porzione separata di urina, ma anche la loro quantità totale giornaliera. Per fare ciò, raccogliere l'urina del paziente per 24 ore, misurarne il volume in millilitri e determinare la concentrazione proteica in una porzione di urina quotidiana in g%. La quantità di proteine ​​escrete nelle urine in 24 ore viene determinata in base alla quantità giornaliera di urina in grammi.

Significato clinico delle proteine ​​nelle urine

Proteinuria, come sintomo diagnostico, scoperto nel 1770 dal Cotugno.

Le più importanti proteinuria renale funzionale nei bambini sono le seguenti:

1. Proteinuria fisiologica neonato. Si verifica nella maggior parte dei neonati e non ha alcun significato negativo. Si spiega con un filtro renale debole, danni alla nascita o perdita di liquidi nei primi giorni di vita. La proteinuria fisiologica scompare il 4°-10° giorno dopo la nascita (in bambini prematuri Dopo). La quantità di proteine ​​è piccola. È la nucleoalbumina.

Albuminuria neonatale, in corso per molto tempo, può essere un sintomo di lue congenite.

2. Ictus albuminuria. Sono causati dal superamento della soglia di normale irritabilità del filtro renale da significative irritazioni meccaniche, termiche, chimiche, mentali e di altro tipo - perdita di liquidi nei neonati (proteinuria da disidratazione), bagni freddi, alimenti abbondanti ricchi di proteine ​​(proteinuria alimentare), palpazione del rene (albuminuria palpatoria), superlavoro fisico, paura, ecc.

L'albuminuria da ictus appare più facilmente nei bambini in gioventù che nei bambini più grandi e negli adulti, fin dall'infanzia e bambino piccolo si irritano più facilmente. La disidratazione albuminuria (disturbi dell'alimentazione, debolezza dei liquidi, tossicosi, diarrea, vomito) è particolarmente frequente nei neonati.

L'albuminuria dell'ictus è benigna. Essi scompaiono immediatamente dopo l'eliminazione delle cause che li provocano. Il sedimento talvolta contiene singoli leucociti, cilindri ed eritrociti. La proteina è molto spesso la nucleoalbumina.

3. Proteinuria ortostatica. Questa condizione è tipica della scuola materna e età scolastica. Si verifica a causa di disturbi vasomotori nell'afflusso di sangue al rene. Tipico dell'albuminuria ortostatica (da cui il nome) è che compare solo quando il bambino è in piedi, quando la colonna vertebrale è in posizione lordotica. Quando si è sdraiati scompare. Viene rilasciata la nucleoalbumina. Nei casi dubbi si può ricorrere all'esperimento ortostatico, che consiste nel seguente: la sera, un'ora prima di andare a letto, il bambino svuota la vescica; Al mattino, quando si alza dal letto, rilascia nuovamente l'urina. Questa urina non contiene proteine. Quindi il bambino viene messo in ginocchio per 15-30 minuti con un bastone dietro la schiena, tra i gomiti piegati di entrambe le mani. Si crea una posizione lordotica che porta al rilascio delle proteine, senza alterazioni del sedimento.

Con l'albuminuria ortostatica possono essere rilasciati 8-10 g di proteine ​​al giorno.

La proteinuria renale organica ha il significato clinico più importante tra tutte le proteinuria. Sono causate da malattie renali organiche (nefrite, nefrosi, nefrosclerosi). La proteinuria è uno dei sintomi più importanti e meglio conosciuti malattie organiche rene

1. Nella glomerulonefrite acuta e cronica, la proteinuria si verifica regolarmente. La quantità di proteine ​​è moderata e non esiste alcun parallelo tra il grado di proteinuria e la gravità della malattia. Al contrario, la nefrite cronica e più grave spesso si presenta con meno proteine ​​rispetto alla nefrite acuta. Dopo la nefrite acuta, a volte per un lungo periodo (anni), vengono rilevate piccole quantità di proteine ​​nelle urine, senza significato patologico(“albuminuria residua”). Non dobbiamo dimenticare che può verificarsi anche una “nefrite senza proteinuria”. A volte le proteine ​​si trovano in una porzione di urina, ma non in un'altra. Il rapporto tra albumina e globulina nella nefrite acuta è basso, mentre nella nefrite cronica è più alto.

2. Con la nefrosclerosi, la quantità di proteine ​​nelle urine è molto piccola, spesso si riscontrano forme della malattia senza proteine ​​nelle urine.

3. Di tutte le malattie renali, la nefrosi si manifesta con la proteinuria più grave.

4. In condizioni infettive e tossiche si verificano la cosiddetta proteinuria febbrile e tossica. Si tratta di nefrosi acuta, in cui la quantità di proteine ​​è piccola. Questo gruppo comprende anche la proteinuria durante condizioni convulsive (convulsioni), iperfunzione della tiroide, ittero, intussuscezione, enterocolite, ustioni, anemia grave, ecc. Queste albuminuria sono benigne e passano rapidamente (albuminuria transitoria).

5. Quando il sangue ristagna nei reni, si verifica la cosiddetta albuminuria congestizia, caratteristica dei pazienti cardiaci in fase di scompenso. Si verifica anche con ascite e tumori addominali.

Nell'albuminuria febbrile, tossica e congestizia, l'aumentata permeabilità del filtro renale è particolarmente pronunciata. Secondo alcuni autori molte di queste proteinuria si manifestano senza danno organico al parenchima renale.

Albuminuria extrarenale sono solitamente causati da impurità proteiche (secrezioni, cellule decomposte), che vengono rilasciate dalle cellule malate tratto urinario e genitali. L'albuminuria extrarenale è più comune a causa della cistopielite (piuria), meno spesso a causa di vulvovaginiti, calcoli e tumori delle vie urinarie.

Con l'albuminuria extrarenale, nel sedimento si trova un gran numero di leucociti e batteri. Gli elementi renali non vengono quasi mai trovati. La quantità di proteine ​​è piccola. L'urina filtrata o centrifugata solitamente non risulta positiva alle proteine.

Nei soggetti in convalescenza dalla pielite, l'albuminuria scompare dopo batteriuria e piuria.

Va sottolineato come fenomeno caratteristico che nella prima infanzia le malattie renali organiche compaiono estremamente raramente, quindi anche la proteinuria organica è rara. Di questi, ci sono principalmente quelli febbrili e tossici. A differenza della proteinuria organica, l'albuminuria da ictus è molto comune nei bambini in tenera età.

Nei bambini più grandi, la proteinuria organica è più spesso funzionale. In generale, con l'età, la proteinuria funzionale si verifica meno frequentemente e la proteinuria organica più spesso.

Studi elettroforetici delle proteine ​​nelle urine